干细胞制剂检测技术

1. 细胞鉴别

　　包括细胞形态观察、短串联重复序列检测（STR）、流式检测表面标志物及特定基因表达产物等，对不同供体及不同类型的干细胞进行综合的细胞鉴别。针对诱导多能干细胞可提供多能基因免疫荧光染色和AP染色技术。

2. 存活率及生长活性

　　采用台盼蓝染色和血球计数板进行细胞计数、流式检测细胞周期、生长曲线绘制等方法，判断细胞活性及生长状况。

3. 纯度和均一性

　　通过流式检测细胞表面标志物对制剂进行细胞纯度或均一性的检测。

4. 无菌试验和支原体检测

　　应依据现行版《中华人民共和国药典》中的生物制品无菌试验和支原体检测规程，对细菌、真菌及支原体污染进行检测。针对临床使用的干细胞制剂，采用荧光定量PCR方法，建立快速细菌和支原体检测，在3h内完成放行检验。

5. 内毒素检测

　　应依据现行版《中华人民共和国药典》中的内毒素检测规程，采用凝胶法对内毒素进行检测。

6. 异常免疫学反应

　　检测异体来源干细胞制剂对人总淋巴细胞增殖和/或对不同淋巴细胞亚群或小鼠胶质细胞（BV2）增殖能力的影响，以检测干细胞制剂可能引起的异常免疫反应。

7. 致瘤性

　　应依据现行版《中华人民共和国药典》，通过动物体内成瘤和致瘤试验，检验细胞的成瘤性和致瘤性；体外实验通过软琼脂克隆形成实验检测细胞成瘤性；端粒酶活性检测细胞生长增殖状态。

8. 生物学效力试验

　　通过检测干细胞分化潜能、诱导分化细胞的结构来判断干细胞制剂与治疗相关的生物学有效性。对间充质干细胞，进行如成脂肪细胞、成软骨细胞、成骨细胞分化能力的检测。对未分化的胚胎干细胞和iPS细胞，通过体外三胚层分化实验，和在SCID鼠体内形成畸胎瘤的能力，检测其细胞分化的多能性。

9. 培养基及其他添加成分残余量的检测

　　应对制剂制备过程中残余的、影响干细胞制剂质量和安全性的成分，如牛血清蛋白、抗生素、细胞因子、仙台病毒残余等进行检测。