干细胞制剂检测技术


发布日期:2021-01-05
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1. 细胞鉴别

  包括细胞形态观察、短串联重复序列检测(STR)、流式检测表面标志物及特定基因表达产物等,对不同供体及不同类型的干细胞进行综合的细胞鉴别。针对诱导多能干细胞可提供多能基因免疫荧光染色和AP染色技术。

2. 存活率及生长活性

  采用台盼蓝染色和血球计数板进行细胞计数、流式检测细胞周期、生长曲线绘制等方法,判断细胞活性及生长状况。

3. 纯度和均一性

  通过流式检测细胞表面标志物对制剂进行细胞纯度或均一性的检测。

4. 无菌试验和支原体检测

  应依据现行版《中华人民共和国药典》中的生物制品无菌试验和支原体检测规程,对细菌、真菌及支原体污染进行检测。针对临床使用的干细胞制剂,采用荧光定量PCR方法,建立快速细菌和支原体检测,在3h内完成放行检验。

5. 内毒素检测

  应依据现行版《中华人民共和国药典》中的内毒素检测规程,采用凝胶法对内毒素进行检测。

6. 异常免疫学反应

  检测异体来源干细胞制剂对人总淋巴细胞增殖和/或对不同淋巴细胞亚群或小鼠胶质细胞(BV2)增殖能力的影响,以检测干细胞制剂可能引起的异常免疫反应。

7. 致瘤性

  应依据现行版《中华人民共和国药典》,通过动物体内成瘤和致瘤试验,检验细胞的成瘤性和致瘤性;体外实验通过软琼脂克隆形成实验检测细胞成瘤性;端粒酶活性检测细胞生长增殖状态。

8. 生物学效力试验

  通过检测干细胞分化潜能、诱导分化细胞的结构来判断干细胞制剂与治疗相关的生物学有效性。对间充质干细胞,进行如成脂肪细胞、成软骨细胞、成骨细胞分化能力的检测。对未分化的胚胎干细胞和iPS细胞,通过体外三胚层分化实验,和在SCID鼠体内形成畸胎瘤的能力,检测其细胞分化的多能性。

9. 培养基及其他添加成分残余量的检测

  应对制剂制备过程中残余的、影响干细胞制剂质量和安全性的成分,如牛血清蛋白、抗生素、细胞因子、仙台病毒残余等进行检测。


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